Colorazione dei preparati citologici

Materiale didattico: Prof. Giuliano Bettini
Video: Dott. Filippo Scarpa e Dott.ssa Silvia Sabattini

Una volta allestiti, gli strisci devono essere opportunamente colorati. Le colorazioni più frquentemente utilizzate in medicina veterinaria sono quelle di tipo Romanowsky, le stesse usate anche in ematologia (May Grünwald-Giemsa, Wright). Sono inoltre disponibili in commercio dei kit di colorazione di tipo Romanoswsky rapida che risultano estremamente pratici nella routine diagnostica (es. Diff-Quik, DipStat).
L’Ematossilina Eosina e la colorazione di Papanicolau, studiata per la citodiagnostica oncologica, sono usate pressoché unicamente in medicina umana. Esse conferiscono al preparato eccellenti dettagli nucleari, ma richiedono numerosi passaggi e non colorano bene i microrganismi e il citoplasma cellulare.
Le colorazioni ematologiche e rapide sono effettuate su strisci asciugati all’aria, mentre la colorazione di Papanicolau richiede la fissazione in alcool dello striscio ancora fresco.
Sui preparati citologici possono inoltre essere eseguite, quando necessario, colorazioni citochimiche per mettere in evidenza microrganismi (Gram, Ziehl-Neelsen) o particolari sostanze (PAS per i mucopolisaccaridi, Sudan per i lipidi, Fontana per la melanina, Perls per il ferro, Rosso Congo per la sostanza amiloide, ecc), oppure colorazioni immunocitochimiche per la dimostrazione di particolari determinanti antigenici (marker tumorali, definizione delle popolazioni cellulari).

Colorazione di May Grünwald-Giemsa

• Asciugare gli strisci all'aria.
• Versare in un cilindro graduato di vetro una quantità di acqua distillata pari a 6 ml per ogni preparato da colorare, aggiungervi con una pipetta una goccia di Giemsa per ogni ml di acqua e mescolare la soluzione così ottenuta.
• Coprire i vetrini (disposti orizzontalmente) con la soluzione di May-Grünwald e lasciare agire per 3 minuti.
• Lavare con abbondante acqua distillata e lasciarla per 1 minuto.
• Allontanare da ogni vetrino l'acqua distillata, versare su ciascun preparato la soluzione di Giemsa diluita come al punto 2 e lasciare agire per 25/30 minuti.
• Lavare in acqua corrente e allontanare i residui di colorante dalla superficie del vetrino opposta a quella colorata.
• Mettere il vetrino in posizione obliqua e fare asciugare all'aria.

Trascorse circa 24 ore dalla colorazione, è consigliabile montare gli strisci con vetrini coprioggetto, per permettere una migliore visione e conservazione dei preparati.